Entwodiksyon sou prensip ak aplikasyon konpozan jeneral spèktrofotomèt la

Spèktrofotomètr la lajman itilize nan rechèch byolojik, chimik, klinik ak anviwònman.
Spectrophotométrie mezi ki kantite limyè yon pwodui chimik kapab absòbe pa pase yon gwo bout bwa nan limyè nan yon echantiyon nan yon spektrofotomètr.
Pa mezire entansite a limyè detekte, metòd la kapab itilize detèmine konsantrasyon nan solute nan echantiyon an.
Konsèp la nan spèktrofotometri
Fasèt la voye bay echantiyon an konsiste de yon gwo bout bwa fotonik.
Lè foton yo rankontre molekil yo nan echantiyon an, molekil yo kapab absòbe kèk nan yo, redwi kantite foton yo nan gwo bout bwa a epi redwi entansite siyal deteksyon an.
Transmisyon an se yon pati nan limyè a pase nan echantiyon an. Li se defini kòm entansite a limyè pase nan echantiyon an nan entansite a limyè entansite.
Absorption la se opoze a transmètans la, ki koresponn ak kantite lajan an mezire pa spektrofotomètr la.
Selon absansyon an, konsantrasyon echantiyon solisyon an ka detèmine nan bòdwo lwa Lambert, ki montre ke gen yon relasyon lineyè ant absansyon ak konsantrasyon echantiyon an. Selon lalwa sou byè Lambert, absansans se pwodwi koyefisyan absòpsyon, ki se yon mezi nan kantite limyè absòbe solit la nan yon longèdonn bay ak distans nan ki limyè pase. Egzanp, oswa vwayaj distans, ak konsantr solute. An jeneral, bi pou mezire absansans se pou mezire konsantrasyon echantiyon an.
Eleman nan spektrofotomètr
Chak spektrofotomètr konsiste de yon sous limyè, yon collimator (lantiy oswa yon aparèy konsantre pou transmèt travès fò ak dwat), yon monokrom pou separe travès nan longèdonn diferan, ak yon seleksyon longè pou chwazi vag la oswa ren nan longè a vle. Longèdonn limyè yo itilize nan spèktrofotomètr ki prezante nan videyo sa a se nan limyè iltravyolèt ak vizib. Spèktrofotomètr a gen ladan tou yon detantè detantè, yon photodetector ak yon ekran ki montre rezilta detektè a.
Spèktrofotomètr ki pi resan an dirèkteman makonnen nan yon òdinatè, kote paramèt eksperimantal yo ka kontwole ak rezilta yo parèt.
Travay prensip spektrofotomètr
Lè wap pote espèkofotometri a, li enpòtan pou w pran prekosyon apwopriye, tankou mete gan, selon kalite solisyon byolojik oswa chimik ou itilize.
Vire aparèy la ak pèmèt lanp lan ak elektwonik nan chalè anvan ou mezire UV-Vis espèk nan echantiyon an.
Prepare yon echantiyon vid nan menm solisyon an ki gen menm pH ak menm fòs iyonik, men san eleman yo dwe analize; depi kivèt la ak sòlvan ka dispèse limyè, li nesesè pou analize echantiyon an.
Se detantè nan spektrofotomètr tradisyonèl fèt yo kenbe plastik ak bòl kwatz. Pipèt solisyon orijinal la nan yon bòl.
Apre ou finn efase tout anprent dwèt yo ak pwojeksyon yo sou deyò bòl la, mete kivèt la kòrèkteman nan detantè echantiyon yo epi fèmen pòt kouvèti a.
Pa janm bliye fèmen pòt la paske radyasyon UV ki sòti nan yon spèktrofotomè louvri ka domaje je ou ak po.
Pwogram sa vle di longèdonn lan oswa ranje longèdonn ki pral transmèt nan echantiyon an. Sa depann sou longèdonn ki pi bon ke eleman ki te analysé kapab absòbe. Se machin lan Lè sa a, zewo pa mezire echantiyon vid la, ki soustraksyon absòpsyon anba a akòz tanpon an echantiyon.
Tou depan de ki kalite eksperyans spèktrofotometri w ap fè, li kapab nesesè jenere yon koub estanda anvan mezi echantiyon, ki soti nan ki konsantrasyon nan konpoze an analize nan echantiyon an ka detèmine.
Pèmèt echantiyon an rive nan tanperati a apwopriye ak melanje dousman pou fè pou evite entwodiksyon bul. Echantiyon an ka Lè sa a, dwe ajoute dirèkteman nan bòl an andedan machin nan ak yon lekti kapab fèt.
Apre echantiyon an te mezire pou absansyon, eksperyans lan byen kalkile; pou egzanp, pou detèmine nivo konsantrasyon oswa aktivite anzim.
Aplikasyon spektrofotomètr
Youn nan itilizasyon komen spektrofotomèt se pou mezire dansite selil yo. Ka mezi dansite selil yo ka itilize yo pwodwi koub la kwasans logaritmik nan bakteri, ki soti nan tan ki pi bon pou entegrasyon nan recombinant pwoteyin ka detèmine.
Spèktrofotomètr a kapab itilize tou pou mezire vitès reyaksyon chimik la. Nan reyalizasyon sa a, absorption la itilize pou kontwole reyaksyon anzimatik, ki disparèt avèk tan nan yon reyaksyon entèmedyè 452nm. Yo kapab kalkile pousantaj etap enzimatik sa a lè ou matche done yo ak ekwasyon ki apwopriye a.
Entwodiksyon nan mikwo spèktrofotomèt elimine bezwen nan detantè echantiyon. Spèktrofotomè sa yo itilize tansyon sifas pou kenbe echantiyon an.
Microspectrophotometer se meyè chwa pou mezire mas ak konsantrasyon echantiyon piti ak chè, tankou biomolécules, enkli protéines ak acides nucléiques.
Absorption nan pwoteyin nan 280nm depann sou kontni an nan chenn aromat bò yo te jwenn nan triptofan, tirozin ak fenilalanin, osi byen ke kosyon nan disulfure ant deysiste yo.
Ka konsantrasyon an nan pwoteyin dwe detèmine pa absorption li yo nan 280nm ak koyefisyan absòpsyon li yo, ki se ki baze sou konpozisyon an nan asid amine.
ADN ak ARN gen absorption maksimòm nan 260nm, ki soti nan ki konsantrasyon yo ka detèmine. Ka pite a nan asid nikleyik tou ka evalye soti nan rapò a nan lekti absòpsyon nan longèdonn espesifik.